海藻糖酶測(cè)定試劑盒

（Trehalase，THL; 分光光度法 50T/24 樣）

一、測(cè)定意義：

THL廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。

海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而

直接用于能量供應(yīng)。

二、測(cè)定原理：

THL 催化海藻糖產(chǎn)生葡萄糖，經(jīng)葡萄糖氧化酶作用

生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫跟

4-氨基安-替比林偶聯(lián)酚反應(yīng)生成顯色物，在 505nm 處測(cè)

定其吸光度值，反映 THL 的酶活性。

三、需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃

比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

四、試劑的組成和配制：

提取液：液體25mL×1瓶，4°C保存；

試劑一：液體10mL×1瓶，4°C保存；

試劑二：液體25mL×1瓶，4°C保存；

試劑三：液體25mL×1瓶，4°C保存。如果出現(xiàn)結(jié)冰現(xiàn)象可

以37溫浴溶解后使用。

工作液：試劑二和試劑三等比例混合，需要多少配多少，

現(xiàn)配現(xiàn)用。

五、測(cè)定步驟：

1、樣本前處理：

（1）細(xì)菌或細(xì)胞樣本：

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管中，離心后棄上清；按照

細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)）和提取液體積（mL）500-1000:1

的比例（建議 500 萬(wàn)中加入 1mL 提取液），超聲破碎（冰

浴，功率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）

后，8000g，4°C 下離心 10min，取上清放置在冰上待測(cè)。

（2）組織樣本：

按照組織質(zhì)量（g）和提取液體積（mL）1:5-10 的比

例（建議稱取 0.1g 組織加入 1mL 提取液），冰浴中勻漿。

8000g，4°C 離心 10min 后取上清放置在冰上待測(cè)。

（3）血清（漿）樣本：

按照血清（漿）和提取液比例 1:5-10 的比例（建議

0.1mL 血清加入 1mL 提取液），冰浴中勻漿后 8000g，4°C

離心 10min 取上清放置在冰上待測(cè)。

海藻糖酶測(cè)定試劑盒