研究如何讓標準菌株*

工作菌株不可代替標準菌株，標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。

在這里有些概念需要理順：

標準菌株，這里指的是凍干菌粉。

儲備菌株：復蘇后的1代培養(yǎng)物。

工作菌株：由儲備菌株轉種傳代而來。



實驗室必須建立和保存其所有菌種的進出、收集、貯藏、保存、確認試驗以及銷毀的記錄（有了程序，就應該有配套的記錄），應有文件化的程序管理菌種（從標準菌株到工作菌株），該程序包括：標準菌種的申購記錄；從標準菌株到工作菌株操作及記錄；菌種必須定期轉種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關鍵診斷指標的確認，并記錄；每支菌種都應適當標注，注明其名稱、標準號、接種日期、所傳代數(shù)；菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；菌種保存的位置和條件；其它需要的程序。



標準菌株復活



1、安瓿bai瓶裝微生物菌種開封

1-1、用浸過70％酒精的du脫脂棉擦凈安瓿瓶。

1-2、用火焰將安瓿瓶口加熱滅菌。

1-3、用鑷子將鋁封口撕開。

2、菌株恢復培養(yǎng)

2-1、用無菌吸管，吸取0.3-0.4ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振 蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。

2-2、取約0.2ml菌體懸浮液，移植于的瓊脂斜面培養(yǎng)基上，剩余的菌液，注入的液體培養(yǎng)基內(nèi)（3-4mL），然后在建議的溫度下培養(yǎng)。

三、注意事項

3-1、菌種活化前，請將安瓿瓶保存在5-10℃的環(huán)境下。

3-2、厭氧菌的培養(yǎng)，如無特別說明，自開封至接種完成，均需以無氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)。

3-3、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，延遲期較長，需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長。

菌株的基礎知識


試驗過程中，生物樣本可能是zui敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結果一致性的重要保證。（對于菌株的驗收，復蘇傳代，使用，必須有規(guī)范化的程序，以保證菌株的標準特性）



微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內(nèi)或國外菌種收藏機構的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的商業(yè)派生菌株。（一般是ATCC國內(nèi)也有CMCC，食品相關的CICC的菌株也可以。）



標準菌株的復活或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。從國內(nèi)或國外菌種收藏機構獲得的標準菌株經(jīng)過復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標準儲備菌株。標準儲備菌株應進行純度和特性確認。標準儲備菌株保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥，液氮儲存，超低溫冷凍（低于-30℃）等方法保存。低于-70℃或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標準儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。



工作菌株的傳代次數(shù)應嚴格控制，不得超過 5 代（從菌種收藏機構獲得的標準菌株為第 0 代），以防止過度的傳代增加表型變化的風險。1代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉種或傳代一次。必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。