電誘導細胞融合試劑盒的操作步驟

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細胞融合(cell fusion)是兩個或兩個以上細胞融合并形成一個細胞過程。在自然情況下，

體內、體外發生的細胞融合的現象稱為自然融合；體外培養的細胞可用人工方法誘導相同或

者不同細胞間發生融合，稱為人工誘導融合。體外培養的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可以做

融合，但成功概率的是單層貼壁細胞。

電誘導細胞融合試劑盒(Electrofusionof cell)是 20 世紀 80 年代發展起來的一項生物工程技術，其作用原理是先使細胞在在電場

中極化成偶極子，并延電力線成串排列，用高強度、短時程的電脈沖擊穿細胞膜，促使細胞

發生融合。該細胞融合方法具有無毒、融合頻率高、易控制等優點。該試劑盒有效成分經嚴

格無菌處理，僅用于科研領域，不用于診斷或治療。

電誘導細胞融合試劑盒的操作步驟

操作步驟(僅供參考)：

1、 準備細胞：

⑴SP2/0 骨髓瘤細胞：融合前，提前 1 天將 SP2/0 骨髓瘤細胞傳代，培養至其處于對數生

。將該細胞收集于無菌離心管中，1000g 離心 8~10min，棄上清液。加入 10ml 無血

清 RPMI 1640 培養基，將細胞沉淀懸浮起來備用。

⑵淋巴細胞：融合前，取經 3 次用目的抗原免疫的 BALB/C 小鼠脾臟，每次免疫間隔 2~3

周，后一次免疫后 3~4 天處死小鼠，取出脾臟，加入 10ml 無血清 RPMI 1640 培養基，

將細胞沉淀懸浮起來備用。

⑶飼養細胞：融合前，收集健康的 BALB/C 小鼠腹腔中的腹水，將腹水（巨噬細胞懸液）

1000g 離 心 8~10min ， 棄 上 清 液 。 加 入 25ml HAT 選 擇 培 養 液 （ 按 HAT Media

Supplement：含胎牛血清的 RPMI 1640 培養液=1：49 配制），混勻，接種到 96 孔或

24 孔培養板。經培養形成的飼養層細胞，可以輔助新的融合細胞的生長。

2、 細胞融合：

⑴將骨髓瘤細胞和淋巴細胞按 5：1 比例混合，細胞密度為 1.5×10⁷ 個/ml，細胞懸液以 1000g

離心 8~10min，棄上清液。

⑵將細胞沉淀加入 5ml PM 脈沖緩沖液，1000g 離心 8~10min，棄上清液。重復 1 次該

步驟。

⑶用少量 PM 脈沖緩沖液重懸細胞沉淀，一般細胞濃度應達到 2×10⁶ 個/ml，注入細胞電融

合儀的電極小池或融合槽。注意：應根據不同體積的電極小池或融合槽加入細胞懸液，大多

數細胞電融合儀的融合容積在 20~4000μl 之間。按如下條件電泳：交流電場頻率 1MHz，

振幅 250V/cm，時間 30s。在顯微鏡下觀察，看到 80%的細胞已經形成珠串時，立即加穿

孔電脈沖，其條件為：脈沖幅度 5kV/cm，時間常數 20ms，脈沖個數 5，間隔 1s。

⑷1000g 離心 8~10min，棄上清液。向細胞沉淀加入 25ml HAT 選擇培養液，混勻，接種

到 96 孔或 24 孔培養板，37℃ 5%CO 培養 12~24h。

3、 篩選：細胞融合后 12~24h，將細胞接種到 HAT 選擇培養液中，細胞密度達到 60~80%

匯合率之間，容許細胞進一步生長，進行異核體篩選，4~14 天后可觀察到大集落的雜

交瘤細胞克隆。

結果：一般培養 3~5 天后即可見小克隆出現，雜交細胞，呈圓形且透明，其他細胞透

光性差并逐漸死亡。當培養 8~12 天后，克隆可長至孔底面積的 30~50%，此時可取培養

上清液進行抗體檢測。一旦檢測到分泌預定抗體的克隆，應及時將陽性克隆轉種 24 孔培養

板進行擴大培養。

注意事項：

1、應注意無菌操作，避免被微生物污染。

2、 如需 HAT 選擇系列產品，可選擇 Leagene A Media Supplement(50×)、HT Media

Supplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

電誘導細胞融合試劑盒的操作步驟