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上海信帆對于如何配制合適的buffer

點擊次數:1387     更新時間:2016-11-29

       生物系統對pH的變化非常敏感,PH的變化可能改變或甚至終止正在進行的實驗。 因此,配制有效的保持實驗pH穩定的緩沖液對實驗的成功至關重要。

  

建立一個良好的緩沖體系,主要要考慮以下標準:

 

  1. pKa

大多數生物反應發生在PH 6-8之間,因此理想的緩沖液需要具有在該范圍內的pKa值,以提供zui大緩沖能力。 大多數緩沖液在20℃,1個pKa單位內的pH下能地工作。 如果你認為你的實驗會降低反應的pH值,那么選擇一個pKa值略低于工作pH值的緩沖液。 同樣,如果您希望實驗提高您的工作pH,請選擇pKa略高的緩沖液。

 

2. 溶解性

緩沖液應非常易溶于水,在非極性溶劑(脂肪,油和有機溶劑)中極少溶解。 這防止緩沖液積累在細胞膜,囊泡和其他非極性區室中。

 

3. 膜不滲透性

緩沖液不應該容易地通過細胞膜 ,這可以減少緩沖液在亞細胞結構中不成比例的累積。

 

4. zui小鹽效應

鹽雖可以調節化合物的緩沖能力,但高離子緩沖液可引起生物系統的問題或其它反應。 如:在鈣依賴的反應中應該避免檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖液(Tris也能螯合鈣)。

 

5. 對解離的影響

緩沖液濃度、溫度和離子強度應當對緩沖液的解離具有zui小的影響。

 

6. 離子強度

確保你的緩沖液對你的實驗環境的離子濃度沒有太大的影響,正常生理離子強度為:100-200mM的KCl或NaCl。 一些緩沖液,如磷酸鹽,可以顯著影響溶液中離子的濃度。

 

7. 陽離子相互作用

如果緩沖液和陽離子配體形成復合物,該復合物應是可溶的。 理想情況是,至少一些緩沖化合物不會形成復合物。

 

8. 穩定性

緩沖液應當是化學穩定的,抵抗酶促和非酶促降解

 

9. 生化惰性

緩沖液不應影響或參與任何生化反應。

 

10. 光吸收

緩沖劑不應吸收波長在230nm和700nm之間的可見光或紫外光。 這防止了對分光光度測定的干擾。

 

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