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信帆生物:把細胞計數(shù)交給默克 把實驗時間留給文獻

點擊次數(shù):1690     更新時間:2016-05-21

血球計數(shù)板的發(fā)明已經(jīng)有超過100年的歷史了,*,這種傳統(tǒng)的細胞計數(shù)方法雖然廉價,但卻很費時費力。其實,除了這點以外,使用血球計數(shù)板進行細胞計數(shù)還有許多可變的因素,使計數(shù)結(jié)果波動,可能會大大影響我們的實驗。

首先,由于使用的是顯微鏡肉眼觀測計數(shù),人為的因素多,使計數(shù)結(jié)果不準確,誤差大。尤其是經(jīng)過了一整天繁重的實驗后進行計數(shù),或需要同時對上樣的多種樣品進行計數(shù)時,容易使人頭昏眼花,結(jié)果的準確性更難保證。

第二,重復(fù)性差導(dǎo)致實驗結(jié)果可信度低。大家進行細胞實驗時,經(jīng)常需要進行3次以上的平行實驗,以驗證實驗結(jié)果的可重復(fù)性和可信度。有時候是同一個操作者分別在幾天重復(fù)同一實驗,有時候是不同操作者重復(fù)同一實驗。同一操作者細胞計數(shù)的重復(fù)性不會太好,不同操作者細胞計數(shù)的重復(fù)性就更差了,這會導(dǎo)致上樣量的波動,使得平行實驗的結(jié)果CV值增高,可信度降低,在發(fā)文章的時候達不到評委的要求,實驗結(jié)果有被挑戰(zhàn),要求重做或補做實驗,或被退回的可能。

第三,需要合適的稀釋倍數(shù)。稀釋不夠,細胞太濃,不僅數(shù)的時間很長,還會導(dǎo)致數(shù)得眼花,數(shù)著數(shù)著就忘記哪些已經(jīng)被數(shù)過,容易數(shù)錯。稀釋過度,細胞太稀,會使細胞分布不均勻,計數(shù)的結(jié)果代表性下降,誤差增大。一般來說,使得稀釋后的細胞在1x105-1x106/mL濃度范圍內(nèi),使標準計算5個方格共會數(shù)到50~500個細胞。這個濃度范圍很窄,這就要求我們在稀釋細胞前能較好地估計原始樣品的濃度,但很多時候都是很困難的。

第四,由于血球計數(shù)板使用的是抽樣計數(shù)的原理,抽樣計數(shù)時幾個細胞數(shù)目的誤差,會導(dǎo)致原始樣品的細胞數(shù)目的變化被極快地放大。若原始樣品的細胞濃度為2x106/mL,稀釋5倍后,血球計數(shù)板5個標準方格共會數(shù)到200個細胞,若每個方格不小心少數(shù)了3、4個細胞,則計算出來的zui終濃度為1.82x106/mL,會導(dǎo)致原始樣品的濃度產(chǎn)生180,000個/mL的差異。(同樣是原始濃度為2x106/mL的細胞樣品做5倍的稀釋,Scepter 計數(shù)的是50µL稀釋樣品中的全部細胞的數(shù)目(即2x104個細胞),因此能更準確、更地計數(shù)。)

還有,對于壓線的細胞的計數(shù)與否需要遵循前后一致的原則(一般只計數(shù)大方格的上方和右方線上的細胞),這需要計數(shù)時提高熟練程度,才能提高重復(fù)性。

血球計數(shù)板升級替代方案

可能不少老師和同學(xué)都不知道,血球計數(shù)板是由法國科學(xué)家Louis-Charles Malassez于19世紀研發(fā),用于血細胞計數(shù),因此而得名。這項古老而又傳統(tǒng)的技術(shù)一直沿用至今,但并未隨著科研進步而發(fā)展,還給越來越多的研究者帶來很多困擾。

升級是硬道理

古語:“工欲善其事,必先利其器”。小米加能獲得抗戰(zhàn)勝利,但恐怕難以贏得現(xiàn)代戰(zhàn)爭。細胞研究應(yīng)是同理,如今技術(shù)革新已推進到了流式細胞術(shù),然而國內(nèi)多數(shù)實驗室尚不能負擔(dān)的起巨大的投入,或許小型細胞計數(shù)/分析設(shè)備是多數(shù)實驗者的。

市場上常見的自動細胞計數(shù)器,其主要可分為兩類:基于圖像的細胞計數(shù)器(Automated vision-based counter)和基于庫爾特電阻抗原理的細胞計數(shù)器(Scepter為代表),兩者原理及操作方法大相徑庭。以下報告將從性、可靠性、便捷性等方面進行比較,希望能對廣大細胞學(xué)研究者有所助益。

【準確性比較】

圖1. 不同細胞濃度下各種細胞計數(shù)器的計數(shù)結(jié)果與實際數(shù)值的對比


 
上圖可見:血細胞計數(shù)板在高細胞密度時,計數(shù)結(jié)果與實際細胞密度有偏差,而基于圖像的細胞計數(shù)器則在多個濃度下均有偏差。這表明基于庫爾特原理的細胞計數(shù)方法在計數(shù)準確性上優(yōu)于其他兩種細胞技術(shù)方法。(樣品為常見的COS7細胞)

【可靠性比較】

圖2. 不同細胞濃度下細胞計數(shù)的可重復(fù)性比較


 
上圖可見:Scepter的可重復(fù)性均明顯好于血細胞計數(shù)板和基于圖像的細胞計數(shù)器。(樣品為19種細胞系)

elisa試劑盒,人血清,放射免疫試劑盒,PCR代測,WB代測,放射免疫代測,進口ELISA試劑盒,酶聯(lián)免疫代測,酶聯(lián)免疫試劑盒,染色液-信帆生物 


 
上圖可見:傳統(tǒng)的血細胞計數(shù)板的計數(shù)時間遠長于其他兩種計數(shù)。庫爾特原理計數(shù)法與基于圖像的細胞計數(shù)法相比,計數(shù)速度更為穩(wěn)定,而且計數(shù)時間約為后者的一半。Scepter計數(shù)時間zui短,平均時間僅為14秒。(樣品為常見的SF9,MCF7,HEK293細胞)

數(shù)據(jù)來源:血細胞計數(shù)板,您還在使用么?

Scepter的人性化設(shè)計使得使用者能夠輕易上手,只需要五步:儀器校驗、加載芯片、檢測樣品、卸下芯片、數(shù)據(jù)分析,操作方法和移液器相同,而且便于超凈臺內(nèi)操作。

選擇Scepter™手持式細胞計數(shù)器

以上可見,在滿足多數(shù)研究者基本細胞計數(shù)的要求上,手持式細胞計數(shù)器Scepter表現(xiàn)zui為優(yōu)異。此外,Scepter強大的數(shù)據(jù)分析能力也是其另一大特色。Scepter能夠提供細胞直方圖作為細胞計數(shù)依據(jù),并且支持離線分析直方圖。通過直方圖可以獲知細胞直徑分布、細胞狀態(tài)、各細胞組分等數(shù)據(jù)。一次操作,更多的信息量,細胞研究水平因此而更上一層樓。因此,Scepter可以說是血球計數(shù)板的升級替代選擇。

索取Scepter產(chǎn)品資料

關(guān)于升級產(chǎn)品Scepter2.0


 
榮獲諸多獎項的Scepter在2011年升級到了2.0版,新上市的Scepter2.0保留了前代產(chǎn)品直方圖結(jié)果顯示、類似移液器的操作、14秒疾速計數(shù)等諸多特色,新增如下亮點:擴大了可檢測的細胞粒徑(3-36μm),增強了計數(shù)性(在小顆粒物或小直徑細胞上檢測的性增強,CV<5%),同時升級了聯(lián)機軟件的功能,提供更加全面的數(shù)據(jù)分析,使之成為目前市場上小型細胞計數(shù)設(shè)備的選擇!同時,前代產(chǎn)品仍可以通過聯(lián)機升級固件,輕松獲得Scepter 2.0的所有功能,而不影響當(dāng)前的使用效果!更多詳情請垂詢默克生命科學(xué)部-2分機。

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